Ифа тест на сифилис

Преимущества и недостатки метода

Диагностика сифилиса имеет некоторые особенности и отличается от диагностики других бактериальных инфекций. Сложное строение и антигенные свойства бледной трепонемы обусловливают ошибки в интерпретации результатов серологических реакций.

Сдать анализ крови на сифилис предлагают 3 основным группам пациентов:

  1. Скрининг и диспансеризация групп населения (в том числе и беременность, постановка на учет в женской консультации, поступление на работу и оформление медкнижки и так далее).
  2. Скрининг в группах риска (незащищенные половые контакты с человеком, инфицированным сифилисом, лица после принудительных сексуальных контактов, ВИЧ-инфицированные и так далее).
  3. Лица, имеющие симптомы заболевания, или лица с подозрением на сифилитическую инфекцию.

Все лабораторные методы условно подразделяют на прямые и непрямые.

Прямые методы

  1. Идентификация Treponema pallidum в тёмном поле (темнопольная микроскопия).
  2. Заражение подопытных животных (культивирование в лабораторных животных).
  3. ПЦР (полимеразно-цепная реакция).
  4. ДНК-зонд или гибридизация нуклеиновых кислот.

Непрямые методы

Серологические реакции — это методы лабораторной диагностики, базирующиеся на обнаружении антител (сокращенно АТ) к антигенам бледной трепонемы (сокращенно АГ). Они имеют основное значение для подтверждения диагноза.

  1. Нетрепонемные тесты:
    • Реакция Вассермана (РСК);
    • Реакция микропреципитации (МР, РМП) и ее аналоги, которые приведены ниже;
    • Тест быстрых плазменных реагинов (RPR, РПР);
    • Тест с красным толуидином и сывороткой (TRUST);
    • Нетрепонемный тест Лаборатории исследования венерических болезней — VDRL.
  2. Трепонемные тесты:
    • Р-ция иммобилизации Treponema pallidum – РИБТ/РИТ;
    • Р-ция иммунофлюоресценции – РИФ, FTA (разведения сывороток РИФ-10, РИФ-200, РИФ-абс);
    • Р-ция пассивной гемагглютинации (РПГА, ТРПГА, TPHA);
    • Иммуноферментный анализ (ИФА, EIA);
    • Иммуноблоттинг.

Эти методы сводятся к выявлению особенностей гистоморфологии сифилитических проявлений. Внимание уделяется тонкостям строения твёрдого шанкра. Однако, дифференциальная диагностика инфекции с помощью гистологии весьма затруднительна. Гистоморфология используется с другими лабораторными и клиническими тестами.

Высокая чувствительность кроликов к Treponema pallidum (порядка 99,9%) позволяет применять их в диагностике сифилитической инфекции.

Вернёмся к трепонемным и нетрепонемным тестам, так как они используются чаще всего. Рассмотрим их преимущества и недостатки, а также ошибки в интерпретации результатов.

В таблице 1 ниже мы привели возможные результаты анализов и их расшифровку. Как можно видеть в таблице, основное значение при расшифровке имеет комплексная оценка тестов.

Оценка реактивности тестов выполняется также «крестами»:

  1. Максимальный ответ (резко положительная проба) обозначается с помощью 4-х крестов.
  2. Положительная проба обозначается с помощью 3-х крестов.
  3. Слабоположительную реакцию обозначают двумя крестами.
  4. Один крест свидетельствует о сомнительном и отрицательном результате.
  5. Отрицательный ответ маркируют знаком «минус».

Проблема оптимизации лабораторной диагностики сифилиса не потеряла свою актуальность до настоящего времени. Современные методы диагностики, несмотря на стремление учёных привести диагностику к максимально высоким показателям чувствительности и специфичности, требуют контрольной проверки и индивидуального подхода.

Особенностью сифилитической инфекции является феномен серорезистентности, который так и не получил научного объяснения. Диагноз выставляется после полноценного обследования больного эпидемиологическими, клиническими, лабораторными методами.

На фоне экономико-технического развития медицины наблюдается и прогресс в разработке новых критериев диагностики сифилиса. Всё это позволит быстро, успешно и безошибочно лечить пациентов.

В начальной стадии можно использовать бактериоскопический метод, основанный на определении возбудителя – бледной трепонемы – под микроскопом. В дальнейшем широко используются серологические тесты, основанные на определении микробных антигенов и вырабатываемых организмом антител в биологическом материале.

Бактериологические исследование не проводят, так как возбудитель сифилиса очень плохо растет на питательных средах в искусственных условиях.

1. Прямые, которые непосредственно обнаруживают сам микроб:

  • темнопольная микроскопия (выявление трепонем на темном фоне);
  • RIT-тест – заражение исследуемым материалом кроликов;
  • полимеразная цепная реакция (ПЦР), обнаруживающая участки генетического материала микроорганизма.

2. Непрямые (серологические), основанные на выявлении антител к микробу, которые вырабатываются организмом в ответ на инфицирование.

Серологические анализы делятся на две группы

Нетрепонемные:

  • реакция связывания комплемента с кардиолипиновым антигеном (РСКк);
  • реакция микропреципитации (РМП);
  • тест быстрых плазменных реагинов (RPR);
  • проба с толуидиновым красным.

Трепонемные:

  • реакция связывания комплемента с трепонемным антигеном (РСКт);
  • реакция иммобилизации трепонем (РИТ или РИБТ);
  • реакция иммунофлюоресценции (РИФ);
  • реакция пассивной гемагглютинации (РПГА);
  • иммуноферментный анализ (ИФА);
  • иммуноблоттинг.

Методики этих анализов достаточно сложны, поэтому мы остановимся в основном на том, когда они проводятся и насколько точную информацию дают.

Сразу скажем, что основа диагностики сифилиса – серологические методы. Как называется анализ на сифилис: в каждом случае обследование может включать разные методики. Ниже мы более подробно расскажем о них.

Для выявления сифилиса используют различные лабораторные методики. Но ИФА имеет перед ними множество преимуществ. Данный способ исследования позволяет не только определить наличие заболевания, но и стадию, что позволяет сразу назначить эффективное лечение.

Преимущества способа:

  1. Точность и достоверность. Вероятность того, что результат будет ложным, есть только в одном случае – если пациент неправильно подготовится к исследованию.
  2. Минимальное влияние человеческого фактора. Непосредственно процесс анализа является автоматизированным. Риски некорректных действий медицинского персонала исключаются.
  3. Выявление отдельных видов антител. Если анализ используется для определения сифилиса, другие антитела выявляться не будут.
  4. Нахождение малейших, самых незначительных отклонений от показателей нормы. За счет этого можно выявить сифилис на ранних стадиях, когда другие методы могут быть неинформативными.

Не лишен этот метод исследования и некоторых недостатков:

  1. Высокая стоимость. ИФА сложен в проведении, требуется специфическое оборудование и реагенты. Провести тест может только специалист.
  2. Риск ложноположительного результата.
  3. Необходимость в том, чтобы был поставлен предварительный диагноз.

Любой метод исследования не лишен недостатков

Ранее в диагностике сифилиса применялись различные методы, такие как: РПГА (реакция пассивной гемагглютинации), RW (реакция Вассермана), МР (микрореакция преципитации), РСК (реакция связывания комплемента) и другие тесты. Разнообразие анализов в качестве отборочных тестов и отсутствие единой системы нередко приводило к путанице, а в результате — к негативным последствиям, например, когда донор с ложноотрицательным результатом становился посредником в заражении реципиентов.

Нетрепонемные тесты являются скриннинговыми

Теперь нетрепонемные анализы используются для выявления возможного заражения сифилисом у всех групп населения, то есть являются скрининг-тестами. При сомнительном либо положительном результате назначается ИФА либо иной трепонемный анализ. ИФА стал одним из ведущих тестов на сифилис благодаря своим преимуществам:

  • высокая чувствительность, позволяющая выявить антитела к трепонеме в очень низкой концентрации;
  • высокая специфичность достигается за счёт использования антигенов трепонемы бледной;
  • объективность результатов благодаря автоматическому учёту;
  • лёгкость постановки реакции осуществляется благодаря полной комплектации наборов для диагностики;
  • универсальность теста: может применяться для профилактического обследования населения, для диагностики всех стадий болезни и проверки сомнительных результатов.

Антитела к Treponema pallidum схожи на некоторые виды иммуноглобулинов, образующихся при иных видах инфекции, поэтому несмотря на специфичность ИФА ложноположительные результаты могут выявляться в небольшом количестве. Ещё один недостаток ИФА заключается в том, что по мере развития болезни число антител снижается, что может привести к ложноотрицательному результату.

Ранее в диагностике сифилиса применялись различные методы, такие как: РПГА (реакция пассивной гемагглютинации), RW (реакция Вассермана), МР (микрореакция преципитации), РСК (реакция связывания комплемента) и другие тесты.

Разнообразие анализов в качестве отборочных тестов и отсутствие единой системы нередко приводило к путанице, а в результате — к негативным последствиям, например, когда донор с ложноотрицательным результатом становился посредником в заражении реципиентов.

С 2006 года тестирование стало более стандартизированным, ИФА был признан одним из наиболее эффективных методов диагностики и используется в настоящее время в качестве проверочного теста при обнаружении положительного результата нетрепонемного анализа.

Также результат ИФА не может выступать в качестве единого показателя для диагностики сифилиса, а используется в комплексе с иными исследованиями, что не позволяет назвать его точным маркером заболевания.

К минусам теста можно отнести и его относительную дороговизну.

Период беременности — показание для проведения анализа

Что такое ИФА-тест на сифилис?

Иммуноферментный анализ считается одним из самых высокоточных и информативных для выявления заболеваний инфекционного происхождения, в т. ч. и сифилиса. В ходе исследования в крови определяется наличие патогенного возбудителя – белой трепонемы.

Принцип анализа – выявление специфических антител, вырабатываемых иммунной системой в ответ на попадание в организм болезнетворной микрофлоры. В образец крови пациента добавляется специфический реагент, который дает соответствующую реакцию при контакте с антителами к сифилису.

Анализ ИФА имеет широкую область применения. Он используется в диагностике различных заболеваний инфекционного генеза. Чаще всего его применяют в диагностике СПИДа, туберкулеза и сифилиса.

Рекомендации по диагностике сифилиса
Рекомендации по диагностике сифилиса в РФ, Европе и США

Микроскопия Treponema pallidum в тёмном поле

С помощью скарификации, соскоба, сдавливания с эрозий и язвенных дефектов получают экссудат, затем исследуют в микроскоп подготовленный препарат.

Обычно бледные трепонемы выявляют в препарате, полученном из шанкра, из очагов вторичного свежего, вторичного рецидивного сифилиса, а также пунктата лимфоузлов, плаценты.

Основанный на феномене свечения мелких частиц в тёмном поле при попадании луча света (феномен Тиндаля), метод прекрасно позволяет дифференцировать возбудителя сифилиса от других трепонем на основании морфологических отличий и отличий в способах передвижения бактерии.

Для микроскопии используют специальный темнопольный конденсор соответствующего оптического разрешения. Препарат получают способом раздавленной капли (каплю материала наносят на чистое обезжиренное предметное стекло и закрывают очень тонким покровным).

На покровное стекло капают иммерсионное масло. С помощью поворота тубуса и поворота увеличивающей линзы регулируют нужное освещение.

В тёмном поле микроскопа обнаруживаются клетки крови, эпителиальные клетки и сам возбудитель сифилиса. Бледная трепонема выглядит как спираль, очень тонкая, излучающая серебристый цвет, с плавными движениями.

Treponema pallidum необходимо отличать от других трепонем, в том числе и Tr. refringens, которая может содержаться в ротоглотке и на слизистой половых органов. Эта бактерия совершает хаотичные движения, имеет широкие и несимметричные, довольно грубые завитки. Кроме того, Treponema pallidum отличают от Tr. Microdentium, Tr. Buccalis и Tr. vincenti.

Визуализация бактерий в тёмном поле иногда дополняется реакцией флюоресценции. Для этого меченые флюоресцирующим красителем противотрепонемные АТ добавляют в нативный материал. При этом образуется комплекс, называемый антиген-антитело (сокращенно АГ-АТ), который и является объектом для исследования с помощью люминесцентного микроскопа.

Ложноположительный анализ на сифилис — что нужно знать обследуемому

ПЦР, разработанная в 1991 году для обнаружения молекулы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) бледной трепонемы, является высокочувствительным и специфичным, позволяет выявить фрагменты ДНК возбудителя.

Базируется данный анализ на копировании коротких участков ДНК бледной спирохеты, который удовлетворяет заданным параметрам и присутствует в образце. Всё это выполняется в искусственных условиях (in vitro). Реакция проводится в приборе — амплификаторе, который обеспечивает периодизацию температурных циклов. Происходит охлаждение с последующим нагреванием пробирок с погрешностью в 0,1˚С.

Ифа тест на сифилис

ДНК-матрицу прогревают в течение 2 минут при температуре 92-98˚С (максимальная температура используется, если полимераза термостабильна). При нагревании цепи ДНК расходятся из-за распада водородных связей между ними. В стадии отжига температуру реакции снижают для связывания праймера с одноцепочечной матрицей.

Отжиг занимает около 30 секунд, в течение этого времени синтезируются сотни нуклеотидов. Вновь синтезируемые молекулы копируются полимеразой, в результате многократно увеличиваются специфические фрагменты дезоксирибонуклеиновой кислоты. Последующая детекция фрагментов проводится с помощью электрофореза в геле агар.

Это проба, основанная на способности комплемента связываться с комплексами АГ-АТ. Идентифицируют образовавшийся комплекс с помощью гемолитической системы. Кардиолипиновый антиген заметно повышает чувствительность пробы.

Чувствительной является и реакция Колмера, которая заключается в выполнении при различных температурных режимах. Так, первая фаза реакции Колмера протекает при температуре 20˚С в течение получаса, вторая фаза при тепературе 4-8˚С на протяжении 20-ти часов. За это время происходит связывание комплемента.

При выполнении РСК возможно получение резко положительных результатов. Причиной, вероятно, является большой титр антител в неразведенной сыворотке. В этом случае пробы ставят с уменьшающими дозами.

Для дифференцировки стадий сифилиса и оценки эффективности противосифилитического лечения определяют количество АТ в сыворотке.

Позитивность пробы оценивают с помощью крестов, также в реакциях Вассермана, Колмера и Канна указывается разведение сыворотки.

На протяжении всей жизни человеку довольно часто приходится делать ИФА на сифилис (перед устройством на работу и пр.). Положительный результат всегда становится стрессом. Однако не стоит паниковать раньше времени! Иногда ИФА может дать ложноположительный результат. В этом случае есть смысл провести повторное обследование.

Специалисты не советуют беспокоиться после первого же положительного результата ИФА, поскольку это исследование направлено на выявление не самой бледной трепонемы, а антител, которые организм вырабатывает в ответ на атаку патогенных бактерий. ИФА — анализ с высокой точностью (вероятность погрешности меньше 1%). При наличии сомнений врачи не ставят диагноз сразу же, а предлагают пациенту сдать кровь еще раз.

Ложноположительный ответ ИФА возможен при болезнях:

  • соединительной ткани, суставов (васкулит, ревматоидный артрит и пр.);
  • сердца (главным образом это касается воспалительных заболеваний: миокардита, эндокардита);
  • эндокринной системы (диабет);
  • инфекционных (гепатит, туберкулез и пр.).

Ложноположительный результат может быть при беременности или в том случае, если незадолго до ИФА пациенту была проведена вакцинация. Изменить итоги анализа не в лучшую сторону способно и употребление алкоголя, наркотиков.

В достаточно большом количестве случаев положительную реакцию дает проверка крови пациентов, которые уже прошли лечение. У 10% излеченных положительная реакция остается на всю жизнь, поскольку в крови постоянно циркулирует определенное количество антител как иммунный ответ на возникшее однажды заболевание.

Наряду с ложноположительным возможна и ложноотрицательная реакция. В самом начале болезни, когда трепонема только попала в организм, антитела вырабатываются в недостаточном для выявления количестве. Ферменты могут их не зафиксировать, поэтому итоги ИФА оказываются отрицательными.

При наличии подозрений на сифилис (пациент имел незащищенный половой акт, тем или иным образом контактировал с возможными больными и пр.) проводится повторный анализ.

Ложноположительный тест может быть при сахарном диабете

Treponema pallidum является спирохетой, содержащей 42 семейства генов, 17% из них аналогичны белкам иных видов бактерий, что провоцирует в небольшом количестве случаев положительный результат при наличии заражения другими микроорганизмами. Например, при ряде аутоиммунных заболеваний выявляются антифосфолипидные антитела, схожие с антителами при сифилисе.

https://www.youtube.com/watch?v=pzSS7LgCcjI

На рубеже XXI века было установлено, что в данном случае разница между антителами заключается в факторе зависимости, при аутоиммунных болезнях антитела зависимы от p2-гликопротеина-1, при сифилисе — не зависимы. Но на сегодняшний день вопрос о возникновении ложноположительных реакций остаётся открытым, так как причина таких результатов не всегда ясна.

По статистике чаще всего ложноположительные результаты проявляются в следующих случаях:

  • гепатиты;
  • лепра;
  • инфаркт миокарда;
  • интоксикация;
  • заболевания соединительной ткани;
  • аутоиммунные патологии;
  • сахарный диабет;
  • беременность;
  • период менструации;
  • поствакцинальный период.

Трепонема имеет сходство с другими возбудителями

Treponema pallidum является не единственным видом трепанем, к патогенным возбудителям относятся и другие спирохеты: Treponema pertenue (возбудитель явса), Treponema bejel (возбудитель беджеля), Treponema carateum (возбудитель пинты) и многие другие. При микроскопическом осмотре они мало отличаются от бледной трепонемы, а антитела против них схожи на иммуноглобулины при сифилисе.

Положительный результат может отражать наличие болезни в прошлом, так как иммуноглобулины класса G способны задерживаться в кровотоке годами.

В инкубационном периоде результат может быть отрицательным

На начальном этапе болезни ИФА показывает отрицательный результат, этот период является инкубационным, когда первичный сифилис ещё не наступил, и отсутствуют характерные признаки болезни. Инкубационный период по сравнению с данными по инфицированию сифилисом середины XX века увеличился на 7 — 10 дней, в настоящее время составляет около 3 недель.

Третичный сифилис при отсутствии терапии обычно развивается через 3 — 5 лет с момента инфицирования, в некоторых случаях болезнь может проявиться через 10 — 15 лет на фоне бессимптомного протекания и перехода сифилиса из одной стадии в другую. К этому времени число антител значительно снижается или они отсутствуют вовсе, что приводит к ложноотрицательному результату. По некоторым данным на некорректный ложный итог могут повлиять различные инфекционные заболевания, сахарный диабет, приём некоторых антибиотиков.

Ложноположительный сифилис – распространенная проблема, столкнуться с которой может любой человек. Тем более что анализы на это заболевания мы сдаем довольно часто. При определении на стационарное лечение, перед отъездом в санаторий, при приеме на работу. Вполне естественно, что увидев положительные результаты, люди пугаются. Думают о наличии у себя серьезного, опасного для окружающих заболевания.

В каких случаях возможна диагностика ложноположительного сифилиса, интересуются пациенты у своих докторов, и каким из анализов можно верить.

https://www.youtube.com/watch?v=HejBAa-LEwE

Кого стоит известить о результатах, и что делать, если они положительны у беременной женщины?

  • Сифилис: типы анализов на бледную трепонему
  • Ложноположительный сифилис: почему и когда происходят изменения
  • Каким анализам на сифилис можно верить
  • Как понять, ошибочен ли результат анализа на сифилис
  • Ложноположительный сифилис: важность распространения информации
  • Возможен ли ложный анализ на сифилис у беременных
  • Подготовка к исследованию на сифилис во избежание неверных результатов

Человек может получить ложноположительные результаты стандартных бесплатных исследований при целом ряде состояний, не связанных с заражением бледной трепонемой. Например, это возможно при простуде, при аутоиммунных заболеваниях, травмах различной локализации и др. Все эти состояния объединены тем, что при них организм начинает усиленно вырабатывать антитела, призванные бороться с антигенами патогенного микроорганизма.

Ифа тест на сифилис

Врачи называют ряд острых состояний, которые способны провоцировать длительное повышение титра антител. К ним относят:

  • ОРВИ и другие подобные недуги, протекающие с повышением температуры тела;
  • инфарктное поражение миокарда;
  • травмы;
  • период после вакцинации;
  • острые отравления.

Отдельно также выделяют ряд состояний, при которых анализ на сифилис может быть положительным хронически. К таким состояниям относят аутоиммунные болезни, патологии печени, возрастные деформации организма, заражение ВИЧ и вирусными гепатитами и др.

Часто пациенты интересуются вопросом о том, куда обратиться, если сифилидолог определил, что это не сифилис, а реакция положительна.

В первую очередь стоит известить о результатах своего полового партнера. Ему рекомендуется пройти проверку в чисто профилактических целях.

Пациент же направляется от сифилидолога к другим специалистам. Среди них:

  • терапевт в том случае, если есть признаки явного инфекционного процесса типа ОРВИ;
  • инфекционист при подозрении на более серьезные инфекционные болезни, например, на лепру, ВИЧ, гепатиты вирусного типа;
  • иммунолог при подозрении на проблемы с иммунитетом, его снижение из-за причин любого рода;
  • ревматолог в том случае, если есть подозрение на заболевание соединительной ткани и др.

Важно помнить о том, что даже положительный результат с последующим подтверждением диагноза – это не основание для увольнения с работы. Ведь пролеченный сифилис не представляет для окружающих опасности. А если за болезнь вовремя взяться, то наступает полное выздоровление.

В каких случаях назначают ИФА?

Сдавать анализ на сифилис нужно не только в случае предварительно поставленного диагноза. Показания к проведению лабораторного исследования такие:

  1. Наличие на кожных покровах и слизистых оболочках сыпи, шанкров, гумм.
  2. Внезапное угнетение иммунной системы, что приводит к частым инфекционным заболеваниям.
  3. Выявление сифилиса у людей из близкого окружения сифилитика.
  4. Положительная реакция на сифилис, подтвержденная другими анализами.
  5. Наличие заболеваний, имеющих связь с сифилисом.
  6. Продолжительное повышение температуры тела без видимых причин.

Кроме того, исследование на сифилис ИФА обязательно проводится во время беременности и у мужчин, которые собираются стать донорами спермы.

Регулярно сдавать анализ рекомендуется людям, которые ведут активную половую жизнь с разными партнерами и без средств индивидуальной защиты.

Больной может сам прийти в клинику для проведения анализа, если у него присутствуют подозрительные симптомы (характерные высыпания на теле, повышенная температура, боли в мышцах и пр.). Однако на определенных стадиях недуг не проявляется столь явно. Через несколько недель после инфицирования симптомы исчезают, и пациент может ошибочно считать себя выздоровевшим. По этой причине существует ряд случаев, когда анализ ИФА проводится в обязательном порядке:

  1. При устройстве на работу на предприятия, где есть контакт с большим количеством людей, продуктами питания, детскими и медицинскими товарами.
  2. При постановке на учет беременной. Болезнь передается от больной матери младенцу, поэтому важно ее вовремя выявить.
  3. При донорстве крови. Перед тем как сдавать кровь, донор обязан проверить ее на наличие опасных инфекций, в том числе и сифилиса.
  4. Во время подготовки к операции. Проведение такого рода вмешательств подразумевает прямой контакт с кровью больного. Это может быть небезопасно для медперсонала и других пациентов клиники.
  5. При обнаружении симптомов у одного из половых партнеров. В этом случае второй партнер также обязан сдать кровь на пробу.
  6. При прохождении воинской службы, а также в случае тюремного заключения. Обе ситуации предполагают продолжительный контакт с большим количеством людей. Поскольку недуг передается не только половым, но и контактно-бытовым путем, любой человек из окружения инфицированного находится под угрозой.

ДНК-гибридизация

ДНК-гибридизация выполняется in vitro и основана на полном или частичном соединении двух одноцепочечных молекул ДНК в одну молекулу. В случае полного соответствия комплементарных фрагментов объединение происходит легко. Если комплементарное соответствие частичное, то объединение цепочек ДНК происходит медленно. На основании времени слияния цепей можно оценить степень комплементарности.

При нагреве ДНК в буферном растворе разрываются водородные связи азотистыми основаниями, являющимися комплементарными, в результате цепочки ДНК расходятся. Далее получают препарат из двух денатурированных дезоксирибонуклеиновых кислот. При охлаждении одноцепочечные участки ренатурируют. Образуется так называемый гибрид ДНК.

Ифа тест на сифилис

Метод позволяет оценить и анализировать скорость отжига, учитывая особенности (сходства и различия) ДНК между видами или внутри вида.

Применение ДНК-зонда заключается в гибридизации меченого фрагмента ДНК со специфичным участком ДНК для идентификации комплементарных последовательностей нуклеотидов. Для метки зонда используется группа ненасыщенных атомов (хромофоры) или радиоактивные изотопы.

ДНК–зонд применяют для гетерогенного и гомогенного детектирования нуклеиновых кислот. Роль зонда заключается в определении участков, на которых произошло слияние мишень-зонд. Детектирование в гомогенной системе имеет преимущество — позволяет отследить гибридизацию молекул ДНК в реальном времени.

Суть метода сводится в денатурации ДНК и ренатурации (воссоединения цепочек ДНК). Процесс ренатурации нуклеиновой кислоты и ДНК-зонда заканчивается образованием «гибрида».

Специфические последовательности нуклеиновых кислот гибридизуются с ДНК–зондом и, таким образом, выявляются и позволяют оценить количество ДНК в исследуемом материале.

Как подготовиться к сдаче анализа методом ИФА

Для того чтобы достоверность иммуноферментного анализа была максимальной, пациенты должны быть осведомлены о правилах подготовки, при несоблюдении которых результат может оказаться ложноположительным. В целях минимизирования погрешности нужно:

  1. Сдавать кровь на голодный желудок.
  2. За двое-трое суток воздержаться от употребления спиртосодержащих напитков, еды с повышенным содержанием жиров.
  3. Ограничить физические нагрузки за несколько дней до забора крови.
  4. За три часа до сдачи биоматериала отказаться от курения.
  5. Сообщить врачу о лекарственных средствах, используемых в настоящее время, а также об имеющихся заболеваниях и прививках, сделанных недавно.

О том, сколько может делаться анализ, лучше спросить работников лаборатории. Срок проведения связан не только с ее загруженностью, но и с наличием специального оборудования.

Ифа тест на сифилис

Чтобы результат анализа был достоверным, перед процедурой забора крови требуется подготовка. Основные правила и рекомендации:

  1. Ограничение физических нагрузок за несколько дней до обследования. Приходить в лабораторию необходимо в спокойном состоянии, как эмоциональном, так и физическом.
  2. За 2-3 дня до забора биологического материала рекомендуется отказаться от курения. Если полностью бросить пагубную привычку не представляется возможным, количество сигарет необходимо сократить до минимума.
  3. Кровь берется только на пустой желудок. Утром накануне анализа необходимо отказаться от завтрака. Запрещено употреблять какие-либо жидкости. Исключение – небольшое количество воды. Между последним приемом пищи и сдачей крови должно пройти не менее 10 часов.
  4. За 2 недели до анализа необходимо исключить прием каких-либо лекарственных средств. Если это невозможно ввиду медицинских показаний, лаборанту нужно сообщить, какие препараты и как долго принимаются.

Женщинам рекомендуется проходить анализ в середине цикла. Если сдавать кровь во время менструации, сразу после нее или накануне, гормональный всплеск может исказить результат.

Как проводится?

ИФА на сифилис — сложное многоступенчатое лабораторное исследование. Оно проводится для обнаружения возбудителей данной венерической патологии в системном кровотоке, установления их количественного содержания. Иммунологический анализ информативен, не требует длительной подготовки, а расшифровка полученных данных редко занимает более 1-3 дней.

Не всегда результаты исследования соответствуют истинному положению дел. Иногда они бывают как ложноположительными, так и ложноотрицательными. Поэтому для выставления основного диагноза требуется проведение и других лабораторных тестов, в том числе инструментальных.

Анализ ИФА на сифилис помогает с достаточно высокой точностью обнаружить в крови пациента специфические иммуноглобулины — антитела. Они всегда вырабатываются иммунной системой в ответ на вторжение в организм человека чужеродных белков.

Все они специфичны, то есть для уничтожения бледных трепонем продуцируются антитела, не способные разрушать клетки возбудителей других заболеваний.

Исследование методом ИФА преимущественно назначается пациентам при выявлении у них внешних признаков данной венерологической патологии — это твердый шанкр, гуммы, вторичные или третичные сифилиды на коже и слизистых, укрупнившиеся и болезненные лимфоузлы.

Также биохимическое исследование показано в следующих случаях:

  • трудоустройство. На наличие сифилиса проверяются люди, новое место службы которых предполагает контакты с большим количеством людей. Регулярно сдавать кровь на анализ должны медики, педагоги, продавцы и фасовщики продуктов питания;
  • беременность. Несмотря на огромный объем профилактической информации, врожденный сифилис до сих пор не редкость. Женщинам, встающим на учет по беременности, 2-3 раза проводится исследование ИФА на протяжении всего периода вынашивания ребенка;
  • донорство. В венерологии существует такое понятие как трансфузионный сифилис. Это означает, что инфицирование произошло при переливании крови другого человека с лечебными целями. Доноры обязаны регулярно проверяться на наличие возбудителей сифилиса;
  • подготовка к хирургическому вмешательству. Анализ крови необходим, прежде всего, для предупреждения заражения сифилисом врачей и младшего медицинского персонала;
  • прохождение воинской службы. При выявлении сифилиса срочник не может быть призван до полного выздоровления.

Иногда человек через 2-6 недель после полового контакта, в том числе защищенного, обнаруживает на слизистых или коже весьма характерный шанкр. Он может самостоятельно обратиться в ближайшее медицинское учреждение для анонимной сдачи крови на сифилис.

Анализ на сифилис методом ИФА чаще проводится непрямым неконкурентным методом. Взятый антиген от бледной трепонемы переносится в лунки лабораторного приспособления.

Затем туда же добавляется определенное количество плазмы или сыворотки крови, которые содержат антитела к бледным трепонемам. Наблюдается быстрое связывание биологического материала с подготовленными антигенами, оседание образовавшихся комплексов на дне лунок.

Затем вводятся меченые ферментами антитела и реагенты. При наличии в крови возбудителей сифилиса содержимое лунок окрашивается в различные цвета.

Какая существует профилактика заражения сифилисом?

Также выполняется диагностика сифилиса методом прямого конкурентного ИФА с использованием иммобилизованных на твердой поверхности специфических антигенов. После нанесения на них обработанных биоматериалов требуется некоторое время для инкубации. По ее окончанию происходит образование меченных и немеченных комплексов. После отмывания носителя добавляются субстрато-хромогенные реагенты, окрашивающие биоматериалы при наличии в них специфических антигенов.

Расшифровка данных

Во время проведения анализа крови важно не только обнаружить антигены к возбудителям сифилиса. Обязательно устанавливается вид и количественное содержание в исследуемом образце иммуноглобулинов A, M и G.

Так как каждый из них вырабатывается иммунной системой на определенном этапе развитии болезни, то удается с высокой точностью установить стадию сифилиса:

  • высокая концентрация иммуноглобулинов A указывает, что с момента инфицирования прошло более 2 месяцев. Характерные симптомы сифилиса уже проявились, но пока еще бледные трепонемы не успели нанести серьезного вреда организму;
  • повышенный уровень иммуноглобулинов M свидетельствует о длительном течении сифилиса или его остром рецидиве на начальных этапах развития из-за резкого снижения иммунитета;
  • преобладание в биоматериале иммуноглобулинов G наблюдается чаще при вторичном сифилисе. Для этого периода характерно повреждение внутренних органов, развитие множественных воспалительных и деструктивных процессов.

Если результаты иммуноферментного исследования отрицательные при наличии специфических симптомов сифилиса, оно проводится заново. Анализ может быть повторен и по желанию самого обследуемого. Расшифровкой занимается врач из лаборатории. Результат готов спустя 1-3 дня, но в некоторых случаях, например, при срочной операции, все исследование занимает не более 2-3 часов.

Если ИФА на сифилис дал положительный результат, то он будет обязательно перепроверен. Дело в том, что иммунная система не всегда работает корректно, что становится причиной искажения параметров биохимического исследования.

Для человека, практикующего случайные сексуальные контакты, предстоящее проведение анализа является стрессом. Это также может спровоцировать получение некорректных данных из-за выброса в кровь комплекса биоактивных веществ. Искажение результатов наблюдается и при выкуривании сигареты за 3-5 часов до проведения исследования.

Также при наличии у пациента некоторых заболеваний данные ИФА на сифилис будут перепроверены:

  • патологии сердца, например, миокардит. Это воспаление мышечной оболочки чаще ревматического, инфекционного или инфекционно-аллергического характера оказывает негативное влияние на функционирование иммунной системы;
  • аутоиммунные заболевания — ревматоидный артрит, анкилозирующий спондилоартрит, системная красная волчанка. Они развиваются из-за атаки иммунной системы на собственные клетки организма.
  • результаты ИФА могут быть не всегда достоверны при тяжелых патологиях печени, органов мочевыделения, эндокринных расстройствах. Искажены они и при наличии у пациента респираторных, кишечных, других урогенитальных патологий, а также любой формы туберкулеза.

Как проявляются и лечатся сифилитические язвы?

Ложноположительные результаты нередко спровоцированы беременностью вследствие изменения гормонального фона, недавней вакцинацией из-за присутствия в крови антител к введенным микроорганизмам.

У каждого десятого человека, анализ на сифилис ИФА всегда будет положительным. Даже если он выздоровел после лечения несколько десятков лет назад. Это объясняется постоянной циркуляцией в системном кровотоке ранее выработавшихся иммуноглобулинов.

Насколько чувствителен ИФА — в 99% случаев удается с первого раза правильно выставить диагноз. Но иногда при наличии в организме бледных трепонем результат бывает отрицательным. Чаще всего это происходит на этапе инкубационного периода. Он начинается сразу после внедрения инфекционных возбудителей в кожу или слизистые половых органов, аноректальной области, рта.

Длительность инкубации значительно варьируется:

  • 10 дней у ослабленных больных, людей, злоупотребляющих алкоголем, заразившихся во время нескольких половых контактов;
  • до полугода при постоянном приеме средств с антибактериальной и противомикробной активностью;
  • 3-4 недели во всех остальных случаях.

В этот период сифилис клинически не проявляется, а анализ крови даст ложноотрицательные результаты. Патогенные бактерии только распространяются по организму, а иммунная система еще не начала вырабатывать к ним антитела.

Если человек без каких-либо симптомов сифилиса обращается к венерологу после недавнего случайного полового контакта, врач рекомендует выждать несколько недель. Только после создания в крови определенной концентрации иммуноглобулинов будет гарантирована высокая точность данных иммуноферментного исследования.

Когда анализ крови дал положительный результат, то венерологи требуют, чтобы больной оповестил всех половых партнеров. Они также обязаны посетить лабораторию для обследования на сифилис. При этом недостаточно проведения только одной биохимической диагностики.

Сифилис наиболее часто передается при половых контактах. Но в клинической практике были отмечены случаи инфицирования через предметы личной гигиены. Поэтому невозможно точно определить, когда заразились члены семьи. Им рекомендуется сдать кровь на ИФА через 1, 3, 6 месяцев даже при получении отрицательного результата.

После выдачи на руки бланка с данными пациент должен обратиться к венерологу.

Если диагностика сифилиса дала положительный результат, то врач подбирает антибиотики, к которым наиболее чувствительны обнаруженные трепонемы.

Терапия длится несколько месяцев, после чего переболевший человек ставится на учет в течение 2 лет. В это время он регулярно сдает кровь на анализ для подтверждения окончательного выздоровления.

Чаще всего в лабораториях делают тест ИФА непрямым способом. Для проведения исследования на твердофазные носители прикрепляют антигены, к ним добавляют кровь обследуемого пациента. Если в организме человека есть антитела к трепонемам, то они образуют нерушимую связку с антигенами – АГ-АТ. При положительной реакции присоединенный к объединению антигена и антитела фермент провоцирует окрашивание разной интенсивности.

Для выявления трепонем используют и прямой тест ИФА. При его проведении кровь обследуемого пациента на 30 минут помещают в чистые лунки. Этого времени достаточно для приклеивания антител к их поверхности. После этого к пробе добавляют антигены в избыточном количестве. При наличии антител они связываются в комплекс АГ-АТ.

Ифа тест на сифилис

Процесс объединения при проведении прямой реакции длится от 30 минут до 5 часов. После этого содержимое лунок выливают или декантинируют. Связанные антигены и антитела остаются прикрепленными. Для их выявления проводят ферментативную реакцию. В зависимости от полученного окраса определяют концентрацию антигенов.

Прямые исследования

Для выявления сифилиса используются нетрепонемные тесты или комплекс серологических реакций (КСР). Серологическая диагностика применятся с 5-й недели от момента заражения или с 2-3 недели после появления твердого шанкра. Антитела выявляются практически у всех больных со свежим первичным, вторичным и рецидивным сифилисом. Серологические реакции положительные у 70 — 80% больных с третичным активным сифилисом, в 50 — 60% случаев у больных третичным скрытым сифилисом.

Серологические реакции с применением нетрепонемных тестов могут давать ложноположительные результаты.

Рис. 4. Забор крови для проведения анализа на сифилис.

При проведении трепонемных тестов используются антигены трепонемного происхождения. Их отрицательной стороной является невозможность использования для контроля эффективности проводимого лечения, получение положительных результатов при спирохетозах и невенерических трепонематозах и получение ложноположительных результатов при онкологических заболеваниях, лепре, некоторой эндокринной патологии. Такие тесты, как РПГА, ИФА и РИФ остаются положительными многие годы после излечения сифилиса, а в некоторых случаях и пожизненно.

РИБТ и РИФ являются более специфическими из всех серологических реакций, применяемых для диагностики сифилиса. Они позволяют различать ложноположительные реакции, выявлять поздние формы сифилиса, протекающие с отрицательными реакциями. При помощи РИБТ распознаются ложноположительные реакции у беременных, когда необходимо решить вопрос об инфицированности ребенка.

Суть реакции заключается в том, что антитела, находящиеся в сыворотке крови больного, обездвиживают бледные трепонемы. Отрицательной считается реакция при иммобилизации до 20% возбудителей, слабоположительная — 21 — 50%, положительная — 50 — 100%. РИБТ иногда дает ложноположительные результаты. Тест сложный и трудоемкий, однако, является незаменимым при проведении дифференциальной диагностики скрытых форм заболевания и ложноположительных результатов серологических реакций, в том числе у беременных. РИБТ дает 100% положительный результат при вторичном, раннем и позднем сифилисе, в 94 — 100% случаев — при других формах сифилиса.

Суть реакции заключается в том, что бледные трепонемы (антигены), соединенные с антителами, меченными флюорохромами, издают в люминесцентном микроскопе желто-зеленое свечение. Результат оценивается знаком ( ). С помощью РИФ выявляются иммуноглобулины класса А.  Реакция иммунофлюоресценции становится положительной раньше, чем реакция Вассермана.

Она всегда положительная при вторичном и латентном сифилисе, в 95 — 100% случаев положительная при третичном и врожденном сифилисе. Техника проведения данного вида исследования проще, чем у РИБТ, но заменить РИФ на РИБТ невозможно, так данная реакция уступает РИБТ по специфичности. РИФ-10 (модификация РИФ) более чувствительна, РИФ-200 и РИФ-абс более специфичны.

Рис. 9. Анализ крови на сифилис — реакция иммунофлюоресценции (РИФ).

Ифа тест на сифилис

Суть реакции заключается в том, что сенсибилизированные сывороткой больного бледные трепонемы в присутствии комплемента прилипают к поверхности эритроцитов. Полученные комплексы при цетрофугировании выпадают в осадок. Чувствительность данного теста и специфичность близки к РИФ и РИБТ.

С помощью ИФА определяются иммуноглобулины класса М и G. Методика IgM – ИФА может быть использована в качестве скринингового и подтверждающего теста. Чувствительность ИФА и его специфичность аналогичны РИФ. При сифилисе ИФА дает положительные результаты с третьего месяца инфицирования и довольно долго (иногда всю жизнь) остается положительным.

Рис. 10. Иммуноферментный анализатор.

РПГА основана на способности эритроцитов, на которых адсорбированы антигены бледной трепонемы, в присутствии сыворотки больного склеиваться (гемагглютинация). РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса, в том числе скрытого. При применении высокого качества антигена данный вид серологической реакции превышает все остальные тесты по специфичности и чувствительности.

Рис. 11. РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса.

Рис. 12. Анализ на сифилис — реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (схема).

Рис. 13. Вид перевернутого зонтика, занимающего все дно пробирки, свидетельствует о положительной реакции. В случае, когда эритроциты оседают столбиком («пуговка») в центре дна пробирки говорят об отрицательной реакции.

Рис. 14. Тест РПГА в лабораторных условиях.

Это тесты определения антител IgG и IgM к стандартизированному кардиолипиновому антигену. Их существенным недостатком является сравнительно небольшая специфичность.

Низкая стоимость и простота выполнения позволяют отнести эти тесты к отборочным диагностическим, необходимым для установки предварительного диагноза и скрининга среди населения.

Именно нетрепонемные тесты сдаются при оформлении медицинской книжки, устройстве на работу, постановке на учет в женской консультации.

Недостатки:

  1. Минимальная чувствительность в стадии сифилиса первичного – 70%;
  2. Минимальная чувствительность в стадии сифилиса позднего – 30%;
  3. Возможность появления ложноотрицательных и ложноположительных результатов;
  4. Трудоёмкость выполнения РСК.

Преимущества:

  1. Относительно маленькая стоимость производства тестов;
  2. Получение быстрого ответа;
  3. Возможность их применения для скрининга.

Получение ложноположительных или слабоположительных проб возможно в следующих случаях:

  1. Нарушение технологии выполнения, при блокировании комплекса АГ-АТ.
  2. Наличие у больного аутоиммунных заболеваний (ревматоидный артирит, ревматизм, склеродермия, системная красная волчанка, саркоидоз и др.).
  3. Злокачественные новообразования.
  4. Вирусные и бактериальные инфекции.
  5. Эндокринные заболевания (аутоиммунный тиреоидит, сахарный диабет).
  6. Беременность.
  7. Употребление алкоголя.
  8. Приём жирной пищи.
  9. Старческий возраст.

Как видно из списка, существует достаточно  причин для неверного результата. Поэтому к нему следует весьма настороженно относиться. Рассмотрим наряду с РСК ещё две пробы. Это реакция микропреципитации и VDLR (ее модификация).

Убедительно доказывает наличие трепонем их обнаружение под микроскопом. Вероятность сифилиса при этом достигает 97%. Вместе с тем микробы можно обнаружить лишь у 8 больных из 10, поэтому отрицательный тест не исключает заболевание.

Диагностика проводится в первичном и вторичном периодах, когда имеются твердый шанкр или кожная сыпь. В отделяемом этих заразных элементов и ищут возбудителей болезни.

Более эффективный, но вместе с тем более дорогой и сложный анализ – обнаружение трепонем после предварительной обработки их флуоресцентными антителами. Это вещества, «прилипающие» к микробам и образующие «свечение» их в поле микроскопа.

Чувствительность методов снижается при большой длительности болезни, обработке язв и сыпи антисептиками, а также после лечения.

Биологический метод диагностики RIT высокоспецифичен, но дорог, а результат получается лишь через долгое время, когда у зараженного животного разовьется заболевание. В настоящее время метод практически не используют, хотя он практически самый точный из всех. Отличный анализ крови на сифилис для обнаружения генетического материала трепонем – ПЦР. Единственное его ограничение – относительная дороговизна диагностики.

Ифа тест на сифилис

Убедительным доказательством сифилиса является выявление возбудителей инфекции под микроскопом. Таким способом находят патоген у 8 обследуемых из 10. Отрицательный результат у 2 оставшихся пациентов не говорит о том, что они не инфицированы.

Исследование делают на первичном и вторичном этапе (стадии) заболевания, для которых характерно появление высыпаний на коже и сифилом (изъязвлений) на эпителиальных тканях или слизистых оболочках. В отделяемом из очагов поражения находят патогены, вызывающие венерическое заболевание.

Точнее с определением трепонем справляется сложный тест, обозначающийся как РИФ – реакция иммунофлуоресценции. Образец для исследования предварительно обрабатывают флуоресцентными антителами. Соединения, способные светиться, склеиваются с бактериями. Рассматривая под микроскопом образцы, в случае заражения лаборант видит сверкающих возбудителей.

Тест используют для раннего диагностирования болезни. Чем дольше длится заболевание, тем ниже чувствительность исследовательских способов. Кроме того, она падает после обрабатывания высыпаний и язв антисептическими средствами и у пациентов, прошедших лечение. Изредка исследование дает ложноотрицательные и ложноположительные результаты.

RIT-анализ – высокоточный способ обнаружения сифилиса. При проведении теста результаты приходится ждать долго. До тех пор, пока у инфицированного кролика не проявятся признаки инфекции. Тест применяют очень редко, несмотря на то, что он сверхточен.

С помощью полимеразной цепной реакции на сифилис определяют генетические элементы патогенов. Единственный недостаток ПЦР – дороговизна.

Такие анализы крови помогают выявить антитела, появляющиеся в ответ на кардиолипин – соединение, относящееся к общему строению мембран патогенов.

Ифа тест на сифилис

Самым известным исследованием на сифилис считается реакция Вассермана. РВ входит в категорию реакций связывания комплемента (РСК). Новые методы РСК обладают существенными отличиями от традиционной RW. Но обозначаются они, как и раньше понятием «реакция Вассермана».

Иммунная система, синтезирует антитела (маркеры) в ответ на вторжение трепонем. Их выявляют при анализе крови на сифилис методом реакции Вассермана. Положительный результат RW подтверждает инфицирование обследуемого.

Реакция гемолиза – индекс РВ анализа. При ней взаимодействуют 2 субстанции: гемолитическая сыворотка и эритроциты барана. Сыворотку делают, иммунизируя кролика эритроцитами барана. Активность биологической жидкости снижают путем прогревания.

Показатели РВ зависят от того, прошел гемолиз или нет. В пробе чистой от маркеров происходит гемолиз. При этом реакция на антигены невозможна. Комплемент тратится на взаимодействие с бараньими эритроцитами. Когда в образце есть маркеры, комплимент вступает в реакцию с антигенами. В этом случает гемолиз не протекает.

Компоненты для RW отмеряют в равном количестве. Образец, содержащий сыворотку, антиген и комплимент, прогревают. Добавляют в пробу бараньи эритроциты и сыворотку. Держат при температуре 37 градусов, пока не наступит гемолиз в контрольном образце, который вместо антигена содержит физраствор.

Расшифровка результатов — нормы и отклонения

Расшифровать результат анализа самостоятельно не представляется возможным. Это может сделать только специалист. В таблице результатов будут указаны следующие типы иммуноглобулинов:

  1. IgM. Общее количество этого иммуноглобулина позволяет определить стадию сифилиса. Если результат положительный, это говорит об остром течении заболевания. Если данный иммуноглобулин имеет пометку «отрицательно», инфекционное заболевание может находиться в стадии ремиссии либо протекать в скрытой, хронической форме.
  2. IgG. Наличие этих иммуноглобулинов указывает на пик развития сифилиса. Положительный результат может сохраняться некоторое время после того, как было проведено лечение инфекционного заболевания.
  3. IgA. Указывает на то, что с момента инфицирования бледной трепонемой прошло около 1 месяца. В зависимости от результатов других исследований и выраженности симптоматической картины этот иммуноглобулин может указывать на острую стадию течения болезни.

Антитела класса IgM начинают вырабатываться иммунной системой сразу после попадания в организм инфекционного патогена. Обнаружить их можно уже через 2 недели. Поэтому в случае незащищенного полового акта сдавать анализ можно не ранее, чем через 2-3 недели. Исчезают эти иммуноглобулины примерно через 2 месяца после лечения болезни.

Антитела IgG продуцируются иммунной системой примерно через 4 недели с момента инфицирования. Сохраняются длительное время после лечения, их титры сильнее, чем у антител IgM.

Варианты результатов ИФА-теста на сифилис:

  1. IgA IgM – IgG-: инфицирование бледной трепонемой произошло недавно.
  2. IgA – IgM – IgG : сифилис вылечен.
  3. IgA IgM IgG-: трепонема попала в организм менее 1 месяца назад.
  4. IgA IgM IgG : заражение сифилисом произошло более 1 месяца назад.

Если анализ показывает положительный результат, но совокупный клинический рисунок отсутствует, врач назначает проведение повторного анализа.

Получив на руки расшифровку, пациент не всегда может правильно истолковать ее значение. Только врач способен определить результаты и поставить точный диагноз. В лабораторном бланке могут быть указаны следующие данные:

  • IgA IgM- IgG- – заражение произошло недавно;
  • IgA IgM IgG- – патогенный возбудитель попал в организм менее 30 дней назад;
  • IgA IgM IgG – инфицирование состоялось более месяца;
  • IgA- IgM- IgG – венерическое заболевание пролечено.

При ИФА на сифилис оценивают наличие 3 классов антител (иммуноглобулинов): A, M и G. Эти вещества образуются в крови инфицированного человека в строго определенной последовательности:

  1. Наличие иммуноглобулина A указывает на то, что с момента заражения бледной трепонемой прошло больше месяца.
  2. Антитела M выявляются при длительном присутствии инфекции в организме. Также они могут быть реакцией на обострение хронической болезни.
  3. Иммуноглобулин G организм вырабатывает на самом пике заболевания, а также после уже проведенного лечения.

Интенсивность окрашивания плазмы крови в ярко-желтый цвет при проведении ИФА напрямую указывает на количество антител. Если цвет плазмы слегка желтоватый, результаты ставят под сомнение и процедуру повторяют. При отрицательном результате цвет плазмы не меняется и остается прозрачным.

Положительный результат свидетельствует о наличии вируса

  • наличие инфицирования трепонемой бледной;
  • ложноположительный результат при наличии иных факторов;
  • последствия вылеченного ранее сифилиса.
  • отсутствие заражения;
  • инкубационный (ранний первичный) период сифилиса;
  • поздний период, в том числе поздние этапы развития третичного сифилиса.

Пациенты ошибочно полагают, что если в результатах стоит «положительно» или «отрицательно», то с результатами все понятно. Однако любой доктор скажет, что даже к однозначным результатам стоит относиться с недоверием. Если, например, наблюдается несоответствие клинической картины результатам.

Надпись в графе итогов «сомнительный результат» и вовсе вводит людей, далеких от медицины, в ступор. Первая мысль в этом случае – ошибка исследования.

Сомнительный итог не всегда говорит об ошибке теста. Порой, как отмечают доктора, он возможен после перенесенного сифилиса. Или в том случае, если болезнь только-только начала развиваться, и еще не успела вызвать полноценную реакцию со стороны иммунной системы организма.

Если нетрепонемное исследование показало сомнительные или резко положительные результаты, пациенту обязательно назначается дополнительный трепонемный тест. По нему уже делаются полноценные выводы о том, произошло ли заражение.

Отрицательный результат свидетельствует о здоровье, а положительный о необходимости прохождения терапии. В любом случае, сомнительные тесты рекомендуется перепроходить повторно. Средний интервал между анализами должен составлять не менее 14 дней.

Какой комплекс анализов сдать, если подозревают ложноположительный сифилис, интересуются пациенты у своих докторов. Как уже говорилось, рекомендуется прохождение трепонемных тестов. Они позволяют с точностью до 99,9% поставить верный диагноз.

Перед тестами рекомендуется небольшая подготовка. Во-первых, стоит отказаться от употребления алкоголя, жирной и жареной пищи минимум за 24 часа до тестирования. Во-вторых, явиться в поликлинику или КВД для сдачи крови стоит в утреннее время, на голодный желудок. Перед исследованием рекомендуется небольшой отдых для того, чтобы организм не испытывал стресса.

Диагностика сифилиса до сих пор представляет некоторые трудности из-за вероятности получения ложных результатов обследования. Естественно, пациентам необходимо знать, в каких случаях анализы могут давать неверные результаты, и как перепровериться.

Ведь игнорирование болезни, как и лечение отсутствующей патологии могут привести к серьезным осложнениям!

Ифа тест на сифилис

При подозрении на ложноположительный сифилис обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

С учетом крайне опасного риска влияния трепонемной инфекции на плод, лечение должно быть обязательным при подтверждении диагноза. При этом разработкой схемы лечения должен заниматься только опытный специалист, который будет контролировать здоровье беременной женщины на всем протяжении лечения.

В настоящее время врачи выявляют ложноположительный анализ на сифилис крайне редко, однако такие ситуации встречаются. В связи с чем, обследование на венерическое заболевание должно проводиться только в медицинском учреждении под контролем специалиста-венеролога. Если бы беспокоитесь о достоверности ваших анализов, обращайтесь только к опытным врачам.

Мы – «Гид по венерологии» – готовы помочь вам с выбором лучшей клиники и квалифицированного врача в области венеролога в вашем городе. Наши специалисты гарантировано помогут принять вам верное решение и выбрать наиболее оптимальный вариант для наблюдения и консультирования.

Не стоит бояться и переживать. Чем скорее вы пройдете полное обследование, тем быстрее вы получите достоверное заключение и точный диагноз. И в случае положительного результата, успех терапии зависит только от времени начала лечения.

Ифа тест на сифилис

Вылечить сифилис действительно возможно. Обращайтесь в Гид по венерологии – мы поможем вам!

Непрямые методы

В зависимости от методов, которые использует выбранная лаборатория, тест дает качественный либо количественный результат. В первом случае указывается наличие или отсутствие инфекции, во втором – титр антител с указанием коэффициента позитивности.

Тест, проведенный качественным методом, может дать положительный, отрицательный или сомнительный результаты. В последнем случае говорят о том, что не удалось достоверно определить, есть ли в организме бледные трепонемы. Врач может рекомендовать пройти повторное обследование. Если есть клинические признаки болезни, то сразу назначается лечение.

По титрам каждого из антител можно определить стадию заболевания. Уровень IgM снижается естественным путем в течение года от момента инфицирования. Поэтому данный показатель нужен для диагностики первичного сифилиса. Он является индикатором активности проходящего в организме инфекционного процесса. При проведении успешного лечения уровень IgM снижается в 2-4 раза на протяжении месяца.

Синтез антител IgG увеличивается при вторичном или рецидивном сифилисе. По динамике изменения количества антител судят об успехе проводимой терапии. У некоторых пациентов даже после успешного излечения на протяжении 3-4 лет, а у некоторых в течение всей жизни, при проведении ИФА на сифилис могут быть обнаружены антитела G.

Метод диагностики сифилиса: иммуноферментный анализ крови – ИФА (положительный)

Иммуноферментный анализ (сокращенно ИФА) базируется на специфической реакции антиген-антитело. Биологический материал (сыворотка крови пациента, ликвор) вносят в лунки, на твердой поверхности которых фиксированы антигены бледной трепонемы. Исследуемый материал инкубируют, затем отмывают антитела, не связавшиеся с антигенами (см. рисунок 5).

Идентификация полученного комплекса осуществляется на этапе ферментации с помощью иммунной сыворотки, меченной ферментом. При химической реакции фермент окрашивает полученные комплексы. Интенсивность окрашивания зависит от количества специфических антител в крови пациента и фиксируется спектрофотометром.

Чувствительность ИФА составляет более 95% . Метод используется в автоматизированном режиме для исследования декретируемых групп населения: доноров, беременных и других, для уточнения диагноза при положительных и ложноположительных нетрепонемных тестах.

Ни для кого не является секретом, что своевременная диагностика любого заболевания означает едва ли не половину успеха его лечения. Очень важно подобрать именно те анализы, методы или способы диагностики, которые действительно помогут поставить точный диагноз, а не запутают врача еще сильнее. Иммуноферментный анализ крови давно зарекомендовал себя методом, позволяющим не только получить положительный или отрицательный ответ на вопрос – болен ли человек какой-либо половой инфекцией, но и определить, на какой стадии развития находится заболевание, а также понять, была ли подобная проблема у пациента в анамнезе. ИФА на сифилис на сегодняшний день – один из наиболее чувствительных и специфичных анализов, при этом его точность составляет около 90%.

Тест-системы, которые использует метод иммуноферментной диагностики, предназначены для выявления не только сифилиса, но и множества других инфекций: гепатит, ВИЧ, ЦМВ, герпес, токсоплазмоз и т.д. Анализ ИФА на сифилис позволяет определить антитела (IgG, IgA, IgM) к бледной трепонеме, содержащейся в крови больного человека.

В основе иммуноферментного анализа на сифилис лежит метод взаимодействия выявляемых в крови антител с антигеном возбудителя инфекции. Диагностика будет зависеть от того, какие именно антитела использовались: могут выявляться либо антитела определенного класса, либо в общем. Для диагностики этим методом кровь берется натощак из вены.

  • Иммуноглобулин М в крови показывает, сколько времени прошло с момента заражения. Однако не всегда положительные результаты его наличия означают наличие венерического заболевания: возможно, у человека произошло обострение какой-либо хронической болезни, вызвавшее подобную реакцию.
  • Наличие антител IgA означает, что с момента заражения прошло не менее месяца.
  • Поскольку иммунитет к данному заболеванию не вырабатывается, положительный результат обследования на IgG может показывать как пик заболевания, так и период после пройденной терапии.
  • Заключение

    Тест ИФА на сифилис предназначен для того, чтобы выявить заболевание на любой из стадий. Недостоверным он будет, если сдать кровь в первые 1-2 недели после подозрительного полового контакта. В этот период в организме еще не успеют выработаться антигены. При отсутствии клинических проявлений болезни для подтверждения диагноза необходимы результаты 2 разных тестов, при выявлении твердого шанкра или других симптомов инфекции достаточно 1 анализа.

    Иммуноферментное исследование крови на определение возбудителя сифилиса является сегодня наиболее точным методом постановки диагноза. Механизм проведения анализа заключается в поиске специфических антител, которые вырабатываются иммунной системой в ответ на попадание в организм инфекционного возбудителя.

    Чтобы результаты были достоверными, необходимо соблюдать правила и рекомендации относительно подготовки к сдаче биоматериала. Не исключается вероятность получения ложноположительного или ложноотрицательного результата, что является показанием для повторной сдачи теста через 14 дней.

    Алгоритм диагностики сифилитической инфекции на разных стадиях

    В первичном серонегативном периоде (до 2 месяцев после заражения) проводят поиск трепонемы в темном поле или с использованием флюоресцирующих антител.

    При первичном серопозитивном, вторичном и скрытом сифилисе используют РМП и ИФА, а как подтверждающий тест – РПГА.

    У пациентов с рецидивами вторичного сифилиса исследуют элементы сыпи, пытаясь выделить из них трепонемы для микроскопического изучения.

    В третичном периоде РМП у трети больных отрицательная. ИФА и РПГА положительные, но они могут свидетельствовать не о третичном сифилисе, а о перенесенном ранее заболевании. Слабоположительный анализ скорее говорит о выздоровлении, чем о третичном сифилисе.

    При выставлении диагноза «врожденный сифилис» принимают во внимание наличие болезни у матери, разницу в показателях РМП у матери и ребенка, положительные ИФА и РПГА у новорожденного, иммуноблоттинг.

    Обязательно обследуются на сифилис беременные женщины, особенно те, у которых уже были роды мертвым плодом, неразвивающаяся беременность, ранние выкидыши. Им проводится РМП, ИФА, РПГА. Обследуют на наличие заболевания и перед прерыванием беременности.

    • При нахождении сифилиса в первичной фазе (до 60 дней с момента инфицирования), возбудителя отыскивают на темном фоне или используют для их обнаружения флюоресцирующие антитела.
    • Если патология находится в первичной, вторичной или скрытой форме применяют РМП и ИФА. Подтвердить результаты помогает РПГА анализ крови на сифилис.
    • При рецидивах вторичной инфекции анализируют отделяемое изъязвлений и высыпаний. Из образцов извлекают возбудителей, изучают их с помощью микроскопии.
    • Когда заболевание входит в третичную фазу, у 1/3 пациентов РМП отрицательная. При этом результаты ИФА и РПГА положительны. Однако они не всегда указывают на третичный период, а подтверждают, что человек раньше перенес инфекцию. Слабоположительный тест – доказательство полного излечения, а не развития третичной фазы.
    • Подтверждая врожденный сифилис, анализ крови берут у матери и младенца. Сравнивают данные тестов РМП. Учитывают то, что у малыша ИФА и РПГА положительны. Подтверждают диагноз, используя методику иммуноблоттинга.

    Сифилис, как любая системная патология, поражает весь организм. Поэтому обследование на него проходят при беременности, перед абортом. Пациенткам делают РМП, ИФА, РПГА.

    Правила получения анализа на сифилис

    Чтобы получить направление в лабораторию, нужно посетить своего участкового терапевта. Если хочется сдать анализ быстрее, это можно сделать в частной лаборатории без направления (например, лаборатории Инвитро анализ на сифилис делают быстро и анонимно).

    Как сдать анализ на сифилис? Кровь сдается с утра, натощак. Можно пить лишь чистую воду.

    Подготовка: за два дня до сдачи анализа нужно исключить из питания жирную пищу и особенно алкоголь.

    Как берут анализ? обычным способом из пальца или локтевой вены.

    Сколько делается анализ на сифилис? Результат пробы обычно бывает готов уже на следующий день. Расшифровка может быть взята у врача или в лаборатории.

    Сколько действителен анализ? На срок до трех месяцев.

    Если получен положительный результат, рекомендуется обратиться к дерматовенерологу для дообследования. Интерпретация анализов – работа врача, не стоит ломать голову самостоятельно в поисках правильного ответа.

    Анализ спинно-мозговой жидкости

    Ифа тест на сифилис

    В некоторых случаях для диагностики нейросифилиса берут анализ ликвора.

    Это обследование назначается всем пациентам со скрытым сифилисом, если у них существуют признаки патологии нервной системы, а также при скрытом и позднем нейросифилисе.

    Кроме того, анализ выполняется всем пациентам после выздоровления при сохранении у них положительных серологических реакций. Мы уже писали в нашей статье, что такое явление случается нередко.

    Анализ ликвора при сифилисе назначает и проводит только врач.

    Спинно-мозговую жидкость получают путем прокола между двумя позвонками поясничного отдела. Ее собирают по 4 мл в две пробирки. Затем место пункции обрабатывается йодом и накрывается стерильной повязкой. После пункции пациент должен лежать на животе с приподнятым ножным концом кровати не менее 3-4 часов, затем он может лечь на бок. Постельный режим после пункции показан в течение двух суток.

    Ликвор из первой пробирки исследуют с помощью общепринятых реакций на содержание белка, клеток, определение признаков менингита (воспаления мозговых оболочек).

    Спинно-мозговая жидкость из второй пробирки исследуется на содержание антител к трепонеме с помощью реакции Вассермана, РМП, РИФ и РИБТ, о которых мы говорили выше.

    По степени выраженности нарушений различают четыре вида изменений ликвора. Анализируя их, врач может сделать вывод о наличии разных форм поражения нервной системы (сосудистый нейросифилис, сифилитический менингит, менинго-васкулярный сифилис, спинная сухотка, поздний мезенхимальный нейросифилис), а также о выздоровлении больного с положительными серологическими тестами.

    • людям со скрытой формой инфекции;
    • при симптомах заболеваний нервной системы;
    • бессимптомном, запущенном нейросифилисе;
    • выздоровевшим больным с положительными серологическими реакциями.

    Направление на исследование ликвора дает врач. Из спинномозгового канала берут пункцию в 2 пробирки. Прокол смазывают йодом, закрывают стерильной салфеткой. После процедуры пациент соблюдает постельный режим на протяжении 2 дней.

    В 1 образце определяют количество белка, клеток, следы менингита. Во второй пробе вычисляют антитела к возбудителю сифилиса. Для этого делают тесты: РВ, РМП, РИФ и РИБТ.

    В зависимости от того сколько выявлено нарушений, различают 4 разновидности ликвора. Каждая указывает на определенные повреждения нервной системы. Врач диагностирует:

    • сосудистый нейросифилис;
    • сифилитический менингит;
    • спинную сухотку и прочее.

    Помимо того, по результатам тестов судят о выздоровлении пациента.

    Интерпретация тестов – задача врача. Только он способен сделать правильные выводы, при необходимости назначить дополнительное обследование, поставить точный диагноз. Не стоит делать самостоятельную диагностику при опасной системной патологии. Ошибка в диагнозе влечет за собой серьезные последствия.

    Прямые исследования

    • плановое тестирование при устройстве на некоторые виды работ;
    • плановое выявление риска инфицирования;
    • госпитализация, предоперационный период;
    • донорство;
    • беременность;
    • обследование при симптомах сифилиса.

    Ифа тест на сифилис

    Заподозрить сифилис можно по специфичному признаку — образованию твёрдого шанкра, а также болевым ощущениям в суставах и костях, отёчности половых органов, повышению температуры тела до 38 °С, увеличению лимфоузлов. В качестве профилактики рекомендуется проходить исследование регулярно при активной сексуальной жизни со сменой партнёров.

    В лихорадочный период стоит воздержаться от теста

    Для минимизации риска получения ложного результата следует выполнять правила.

    1. Образец крови сдаётся на голодный желудок, в зависимости от лаборатории период голода должен составлять от 4 до 12 часов.
    2. В предыдущие сутки исключается алкоголь и жирная пища, курение ограничивается минимум за час до исследования.
    3. Накануне анализа пить можно только чистую воду, не допускается употребление соков, кофе, лекарственных препаратов.
    4. Все иные исследования и медицинские манипуляции проводятся после сдачи теста.
    5. Не следует сдавать анализ, если в предыдущие дни отмечалось лихорадочное состояние либо проводилась вакцинация.
    6. Женщинам не рекомендуется проходить тест в период менструации.

    Анализ каловых масс считается одним из самых основных исследований состояния пищеварительной системы человека. Именно он способен показать наличие практически всех видов гельминтов в кишечнике человека. В некоторых случаях именно по анализу кала устанавливается диагноз энтеробиоз – заболевание, вызываемое круглыми червями класса нематод, или острицами.

    При подозрениях на энтеробиоз проводят два типа исследований:

    1. Анализ фекалий на энтеробиоз, позволяющий обнаружить взрослого паразита.
    2. Мазок или соскоб для микроскопического исследования наличия яиц остриц.

    Анализ каловых масс на энтеробиоз достаточно редко может показать в них наличие яиц. Случаи нахождения яиц достаточно редкие, поскольку жизненный цикл острицы не предполагает кладку внутри человеческого организма. Половозрелой самке необходим кислород для осуществления процесса откладывания яиц. Поэтому она вынуждена выходить на поверхность через анальное отверстие, и только после этого откладывать яйца в перианальных складках.

    Но в каловых массах иногда можно обнаружить взрослую особь острицы. При обнаружении паразит помещается в 75% спиртовой раствор, после чего подвергается лабораторным исследованиям. Но процент обнаружения гельминта ничтожно мал, и составляет не более 5% от всего количества сданных анализов на яйцеглист.

    Тем не менее, кал для исследований на энтеробиоз необходимо сдавать, как взрослым, так и детям. И не только при подозрении на данное заболевание собирается кал. Анализ каловых масс на гельминты берут:

    • при устройстве на работу, связанную с общепитом и продуктами питания;
    • для посещения бассейнов;
    • перед плановой госпитализацией;
    • при посещении санаторно-курортного комплекса;
    • при поступлении ребенка в дошкольное и школьное учебное заведение.

    Для подтверждения диагностирования поражения организма острицами, дополнительно назначают взятие соскоба или мазка из области вокруг анального отверстия.

    При получении направления для анализов, к нему прилагается бланк, в котором пациент прописывает свою фамилию, адрес, дату и время сбора каловых масс,говорит инфекционист московского клинико-диагностического центра МЕДСИ на Белорусской, детский врач Мария Алексеевна Серова.

    Из испражнений заборной ложкой отбираются три пробы – в начале, срединной части и с конца выхода фекалий, упаковываются в контейнер, укупориваются крышкой и сдается для лабораторных исследований.

    В домашних условиях фекалии можно собрать в пузырек из стекла с широким горлышком и плотно прилегающей крышкой, поскольку организм человека не может производить дефекацию в строго отведенный или назначенный час. Взятый анализ можно сохранить в холодильнике, поместив его на нижнюю полку, но не более суток.

    Для подтверждения или опровержение наличия остриц в организме человека, одновременно с анализом кала нужно сдавать соскоб или мазок. Такой вид анализа берется исключительно для диагностирования энтеробиоза. Другие гельминты анализом мазка или при соскобе не могут быть выявлены. Их можно обнаружить только, если сдать кал на анализ по подозрению на поражение гельминтами других видов – аскаридами, лямблиями, цепнем.

    Для энтеробиоза нормой показаний является не нахождение в соскобе яиц острицы.

    Сбор производится в утренние часы, сразу, как только человек проснулся. Накануне не желательно подмываться перед сном. Также не рекомендуется принимать водные процедуры утром, до дефекации.

    Ифа тест на сифилис

    В контейнер не нужно помещать все количество фекалий, или столько, сколько получится. Для этого к специальному контейнеру прилагается мерная ложка. Ею производится забор каловых масс, объем которого составляет не более 20 грамм. Важно, чтобы забор был произведен из трех точек – начальной, серединой и конечной.

    Укупоренный контейнер желательно в этот же день сдать в биохимическую лабораторию. Исследование кала делается не более суток, и уже на следующий день выдается результат.

    Соскоб или мазок с перианальных складок, считается основным показателем поражения организма человека острицами. Сдавать кровь при подозрении на энтеробиоз не нужно, поскольку такого анализа не существует.

    В заключении следует отметить, что самым точным показателем наличия остриц в организме человека, является трехкратное обследование методом соскоба, проводимое каждое утро. Допустимым интервалом считается два дня между проведением соскоба. Сколько случаев скрытой формы энтеробиоза выявляет такое обследование! Данные результатов выявляют заболевание более 90% случаев поражения гельминтами.

    Автор Войтенко А.

    Для выявления болезни используют различные методики и биоматериалы. На ранних этапах сифилис определяют с помощью бактериоскопического теста. Образцы исследуют под микроскопом. Прибор позволяет обнаружить штаммы возбудителя. Позднее проводят серологические анализы крови. Благодаря им, в пробах выявляют антигены и антитела сифилиса.

    Способы определения половой инфекции поделены на 2 категории:

    • Прямые, выявляющие патогенный микроорганизм. К ним относят: темнопольная микроскопия, RIT-анализ (инфицирование кроликов биоматериалом для исследования), метод ПЦР – полимеразной цепной реакции (с его помощью находят генетические элементы возбудителя).
    • Непрямые (серологические) позволяют обнаружить антитела к патогену. Они продуцируются иммунной системой, как ответная реакция на заражение.

    Серологические методики поделены на 2 категории: трепонемные и нетрепонемные.

    • Нетрепонемные, включающие: тест с толуидиновым красным, анализ РСК, RPR- тест, исследование крови экспресс-методом РМП.
    • Трепонемные, включающие: иммуноблоттинг, РСК-тест, РИТ-анализ, исследование РИФ, РПГА-тест, ИФА-анализ.

    Ифа тест на сифилис

    Чтобы выявить бледную трепонему – патогена, который выглядит, как спираль и вызывает сифилис, берут пробы:

    • венозной крови;
    • ликвора (секрета из спинномозгового канала);
    • содержимое лимфатических узлов;
    • ткани изъязвлений.

    Если необходимо провести тесты на обнаружение сифилиса, кровь сдают не только из локтевой вены, но и из пальца. На выбор биоматериала и способ исследования влияет тяжесть течения инфекции и оснащенность диагностического центра.

    Высоко результативные анализы проводят, используя трепонемные антигены. Их делают, когда:

    • получен положительный результат при методе РМП;
    • необходимо распознать ошибочные данные, возникающие при скрининговых тестах;
    • подозревают развитие сифилиса;
    • нужно диагностировать скрытно текущую инфекцию;
    • надо провести ретроспективную диагностику.

    Тесты РИФ и РИТ

    У множества пролеченных больных трепонемные исследования проб дают положительные результаты долгое время. По ним нельзя судить о степени эффективности лечения. РИТ и РИФ – сверхчувствительные тесты. Благодаря им получают достоверные данные. Эти анализы трудоемки, они требуют приличных временных затрат, наличия прогрессивного оборудования. Их способны проводить квалифицированные медработники.

    РИТ проводят, когда реакция микропреципитации положительна. Такой анализ крови на сифилис помогает опровергнуть или удостоверить наличие инфекции. Тест сверхчувствителен, он точно указывает заражен пациент или здоров. Но исследование дает достоверные данные только через 3 месяца после проникновения трепонем в организм.

    К сверхточным тестам относят иммуноблоттинг. Такой анализ крови при сифилисе делают редко. Его применяют при обследовании новорожденных детей. Он не пригоден для экспресс-тестирования. Положительные результаты получают с опозданием. Их гораздо раньше дает метод микропреципитации.

    ИФА и РПГА

    К информативным сверхточным методам исследования относят тесты ИФА и РПГА. С их помощью проводят экспресс-диагностирование. Лаборанты делают огромное количество таких анализов. Благодаря им удается установить точный диагноз.

    РПГА анализ на сифилис положителен через 30 дней после проникновения возбудителя в организм. С его помощью диагностируют первичную инфекцию, когда появляются язвы и сыпь. Благодаря ему удается выявить запущенные, скрытно текущие, а также врожденные формы патологии. Но проводят его совместно с нетрепонемными и трепонемными тестами.

    ИФА анализ положителен спустя 21 день с момента заражения. Тест иногда дает ошибочные результаты. Они появляются при системных патологиях, нарушенных обменных процессах. Их результативность сомнительна у ребенка, родившегося от инфицированной матери.

    Рейтинг
    ( Пока оценок нет )
    Сайт для мужчин